蔬菜农药残毒快速检测技术 , 具有简便、灵敏、快速、经济和对检 测人员技术水平要求低等特点, 成 为我G当前检测蔬菜高毒
农药残留 比较普及的一种检测方法, 广泛应 用于蔬菜生产基地、蔬菜大中型批 发市场、各大超市以及各县( 市、区) 检测站, 为提高农产品质量安全, 保 障公众健康发挥了重大作用。但是 在实际应用过程中, 该技术常常出 现样品空白值偏低、样品吸光度值 偏高、抑制率为负值以及假阴性和 假阳性等问题, 给有关人员和部门 带来很多不便。下面本人根据几年 来的工作经验就一些常见问题和大 家共同探讨, 希望对从事此检测工 作的技术人员有所帮助。 1 检测原理 蔬菜农药残毒快速检测酶抑制 技术, 是根据有机磷和氨基甲酸酯 类农药能抑制动物神经系统中乙酰 胆碱酯酶的活性, 造成神经系统传 导介质乙酰胆碱的积累, 影响神经 正常传导, 从而使动物中毒致死这 一原理, 用于
农药残留的检测中。如 果蔬菜的提取液中不含有机磷或氨 基甲酸酯类农药或
农药残留量较 低, 酶活性就不被抑制, 实验中加入 的底物就被酶水解或部分水解, 水 解产物再与加入的显色剂反应产生 颜色; 反之, 不显色或颜色变化很 小。用
农药残毒快速检测仪( 分光光 度计) 测定吸光值随时间变化, 计算 可得出抑制率, 据此判定农药残留 情况。 2 药品配制及样品前期处理 2.1 药品配制及保存 药品的配 制包括提取液、酶、底物和显色剂的 配制。其中提取液的配制是**重要 的, 是其他试剂配制的稀释剂。由于 所用药品纯度的差别, 加之实验温、 湿度对缓冲液 pH 值的影响, 往往 按标准配比配制出的提取液达不到 规定值( pH=0.8) 。所以我们建议在 配制后应该用 pH 计对提取液 pH 值加以校正。酶液、底物、显色剂按 要求配制一般不会有问题, 但要控 制好保存条件。酶液、底物、显色剂 处于温度较高的环境中易变质失 效, 尤其是在夏天。因此, 配制药液 时可以采取分装制( 分成 3～5 个小 瓶) , 即用即取, 从而保证药液质量, 避免药品浪费。酶是此检测技术成 功与否的关键。酶的种类、纯度、活 性、贮存及反应时酶的浓度等都会 对测试结果造成极大的影响。所以, 我们对这些相关因素掌握或控制不 好, 分析的灵敏度、精确度和重现性 将难以保证。 2.2 样品前期处理 取样品时应 按蔬菜种类不同选择适宜的部位。 叶菜类去腐叶、枯叶、蕊叶 , 采集有 代表性的不同植株的叶片; 果菜豆 菜类从表皮**果肉 1～1.5 厘米处取 样, 果肉不要取的过多; 含叶绿素和 其他色素较高的蔬菜取样时不要立 即加液提取, 否则容易被氧化, 提取 液颜色会逐渐加深, 样品本底吸光 值造成人为因素升高。 2.3 培养样品的制备 **好选择 容量与培养量相似的培养管, 这样 就防止了微量的药液在加入时过多 的挂在培养管壁上, 而难以完全进 入到培养液中, 引起较大误差。同时 培养箱的温度和培养时间要严格控 制在 37～38 ℃之间 30 分钟。 3 检测值常见的问题 3.1 空白值 仪器操作shou先要保
证仪器有良好的稳定性, 比色杯无
色差 ( 成套的比色杯一般不会有色差, 对不成套的必须验证) 。其次对
从培养箱取出样品到上机这段时间的长短要严格把握。用丁酰胆碱酯酶的样品空白值随时间变化较大,
丁酰胆碱酯酶稳定性较差、活性较高, 加入底物后反应速度快, 所以应
尽量缩短操作时间, 否则空白值快速减小而达不到要求; 与此相反, 用
乙酰胆碱酯酶的样品受操作时间长短的影响不大, 操作时间不必过于
要求。不同的酶在不同型号仪器、检测条件的不同和酶化学性质上的差异, 样品空白值也是不同的。
3.2 吸光值 样品吸光值偏高是
检测中常见的问题之一。酶活性降
低、样品本底颜色深和反应中化学、物理干扰是其产生的根本原因。酶的失效引起其本身颜色的加深 ( 由
乳白色变为黄色) , 样品本底颜色较深, 以及提取液中因含有样品组织
液形成胶体溶液、乳浊液或悬浮液等使透过光被额外的吸收或被散色, 透光率减小, 在吸光度上表现为
值的增大。
3.3 抑制率 检测结果中偶尔会出现抑制率为负值, 当个别样品有较小的负值误差 ( - 10 %以下) , 这
是在允许范围之内的。它主要是由操作误差所导致的。酶分解底物, 分
解物再与显色剂结合的过程非常快, 假如操作者不熟练就会产生这样的人为误差, 导致抑制率为负值。
随着操作者操作水平的提高, 这是完全可以避免的。
3.4 假阳性与假阴性 假阳性是由于酶活性降低或失活, 导致其在底物中不起作用, 底物不能被水解,
无法与显色剂结合显色造成的。其结果似乎与提取液中存在农药, 酶
的活性被农药抑制类似。假阴性是因为某种农药对某种酶抑制作用很小或无作用而产生的, 表现出无农药的假象。除此, 在反应过程中化学干扰都可能导致假阳性、假阴性问题的发生。我们认为检测人员只能通过选择有较好活性、较强敏感性的酶来尽量减少此类问题的出现。
