人们对餐桌上种类繁多的新鲜水果食用安全的 要求随着生活水平的逐步提高也越来越高。加强果 品质量监控，尤其是加强水果
农药残毒检测，是提高 果品质量安全水平，保障百姓“舌尖上的安全”的关键 措施之一。采用气象色谱仪检测水果农药残毒，固然 以其精度高、检测项目较多等特点而为大多实验室所 采用。但是，此检测方法仪器设备投入资金数额大、 检测成本高、检测场所固定、检测环境条件要求高、人 员操作技术水平要求较高等特点决定了不太适合生 产基地和流通*域要求的快速检测。采用酶抑制方 法，对水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药进行定性快 速检测，仪器和试剂投入成本低、检测方法简便易学、 检测速度快、检测不受实验场所的限制，是水果生产 基地和超市、水果店等流通*域快速自行检测的实用 方法。 1 酶抑制法工作原理 有机磷或氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和 周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介 质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒死亡。 根据这一原理，在水果有机磷或氨基甲酸酯类农药提 取液中加入类似于乙酰胆碱酶的酶试剂，如果水果提 取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药或残留量较 低，酶的活性不被抑制或抑制程度小，实验中加入的底 物就被酶水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜 色变化。反之，如果水果提取液中含有一定量的有机 磷或氨基甲酸酯类农药，酶的活性就被抑制或部分被 抑制，实验中加入的底物就不能被酶水解或少部分被 水解，从而不显色或颜色变化很小。用分光光度计测 定吸光值随时间的变化情况计算出抑制率，就可以判 断水果中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留情况。 2 仪器、试剂与判定标准 北京强盛仪器厂生产的 NY-III 型 6 通道农药残 毒检测仪、NY-Ⅳ型 8 通道
农药残毒检测仪；配套上海 瑞鑫科技仪器有限公司出品的农药残毒速测试剂，包 括提取液试剂 1 袋、底物 1 瓶、显色剂 1 瓶和酶试剂 1 瓶，应由专业商家购买；测试结果为有机磷或氨基甲 酸酯类农药对酶的抑制率（%）；测试结果判读标准为 测试样品的酶抑制率达到 50%以上，其
农药残留毒性 可能超过安全界定标准。适应检测的水果有苹果、梨、 桃、李、杏、香蕉、火龙果、芒果、猕猴桃、木瓜、柚和柠 檬等。 3 检测方法 3.1 试剂配制与保存 3.1.1 提取液配制 将提取液试剂袋中的试剂溶于 510 mL 蒸馏水中，溶解、混匀，配成提取液。 3.1.2 底物配制 向底物试剂瓶中加入 3.1 mL 蒸馏 水，溶解、混匀，备用。在 0~4 ℃环境保存，可使用 5 d。 3.1.3 显色配制 向显色剂试剂瓶中加入 32 mL 提 取液，溶解、混匀，备用。避光冷藏保存。 3.1.4 酶试剂配制 向酶试剂瓶中加入 3.1 mL 提取 液，溶解、混匀。在 0~4 ℃环境保存，可使用 5 d。 3.1.5 未经配制的酶、底物粉剂储存 在冰箱 0 ℃以 下冷冻室保存，有效期为 1 年。 3.2 操作步骤 3.2.1 准备 开机预热 10 min，按确定键进行仪器自 检。随机抽取水果样本，每个样本**少取 0.5~1.0 kg， 样品必须具有代表性。 3.2.2 样品提取 从水果表皮**果肉 0.5~1 cm 处取
10 min，每隔 3 min 晃动一下烧杯，以使水果中农药充
分溶解，或振荡提取 2 min，过滤，滤液即为待检测液。
NY-III 型仪器提取 6 个样品，NY-Ⅳ型提取 8 个样品.
3.2.3 对照测试 对照测试在样本测试之前 4 min
进行。取提取液 2.5 mL、酶 0.1 mL 和 0.1 mL 显色剂，加入烧杯中，混匀静置 15 min（常温 25~35 ℃，秒表计时）后，立即加入底物 0.1 mL。倒置两次混匀后（切勿震荡产生气泡），立即转移到比色皿中，快速放入仪器比色池内，盖好盖板，按对照测试键。对照值在 30 以
上为有效值，反之重做对照测试。测试完毕，马上将对照液从比色池内取出。
3.2.4 样品测试 取待捡测液 2.5 mL 加入烧杯中，加入酶液 0.1 mL 和显色剂液 0.1 mL，混匀静置 15 min
（秒表计时，常温 25~35 ℃）后，马上加入底物 0.1 mL，
倒置两次后（切勿震荡产生气泡），立即转移到比色皿中，快速放入仪器比色池，盖好盖板，按样品测试键执行样品检测程序。
3.2.5 测试结果的判读 若测试样品的酶抑制率达到 50%以上，则表明被测样品的
农药残留毒性可能超过安全的界定标准，建议复检一次或通过气相色谱等仪器检测进一步确认。
4 检测结果误差分析
4.1 实验操作误差
4.1.1 移液操作带来的误差 实验过程中，试剂都是通过移液枪进行添加的。如果按下移液枪后，松手过快会导致所吸液体中含有很多空气，造成所加试剂量减少，影响检测结果。操作过程中，在所剩试剂比较少的情况下，应慢松移液枪按钮，确保吸入试剂足量。
4.1.2 操作速度快慢带来的误差 提取液与样品混合时间越长，越有利于农残溶解，检测结果为不合格的概率就越大。加入酶后放置的时间越长，越有利于使酶被充分破坏，检测结果为不合格的概率就越大。应提高操作熟练程度，按照要求时间进行操作。显示时间带来的误差 同时检测多个样品时，计时显示的时间每次都有差别，误认为是仪器出现了问题。每次放入比色皿并按下检测键的时候，内部计时器都开始 180 s 倒计时。8 个通道的 180 s 倒计时不是同时开始的，它们之间的时间差即为操作时间。所以**后显示的时间因操作的快慢有所不同，属于正常现象，可以放心操作。4.1.4 揭遮光盖时带来的误差 每次放入待检测的比色皿都需要掀起仪器的遮光盖，自然光都会投射进正在检测的比色皿，影响折光率的判断，进而影响检测结果。操作过程中，要尽可能快速完成比色皿的放置，减少遮光盖打开的时间。
4.2.1 环境温度变化带来的误差 实验室温度的变化，可以造成测试温度与对照温度的不一致，从而降低吸光值变化曲线的吻合度，导致抑制率的升高，增加检测结果不合格的概率。同时，温度对溶解速度、酶的活性都有影响。应在实验室安装空调，按照仪器要求调整好温度。
4.2.2 比色皿带来的误差 比色皿分为透光面和磨光面。在检测过程中，透光面表面有水痕、手痕、污迹都会影响仪器对折光率的判断，造成检测结果不准确。检测前应将比色皿清洗干净，操作过程中保持透光面无污物接触。
4.3 检测样本自身导致误差
4.3.1 取样本果皮厚度带来的误差 所取果皮的厚
度，对检测结果有非常重要的影响。果皮越薄，接触农药的面积越大，检测结果为不合格的概率就越大。果皮越厚，所含的果汁和色素就越多，对检测结果造成的误差就越大。应该按照要求从水果表皮**果肉
0.5~1 cm 处取样。
4.3.2 水果色素带来的误差 仪器通过测定吸光值随时间变化情况来进行检测。部分水果中含有的色素会影响仪器对吸光值的判断。对于色素颜色较深的水果品种，应采用较为精密的仪器进行检测。
4.3.3 水果果汁带来的误差 果汁中含有酸（碱）性物质对于酶的活性、提取液的溶解度、显色剂的灵敏度等都会造成影响，从而降低检测结果准确性。取样过程中应尽量采用较锋利的刀具，减少挤出的果汁量。
4.4 介质、试剂导致误差
4.4.1 水质带来的误差 不同水的成分差别较大。水
中含有的矿物质成分、酸性物质、碱性物质，都会对检
测结果产生影响。实验过程中应采用蒸馏水，如条件有限，可用瓶装纯净水代替。4.4.2 各种试剂带来的误差 提取液量多可以稀释农残，酶量多可以提高分解底物的速度，显色剂量多可以增加显色的程度，底物量多可以提高酶的利用效率，以上这些因素都能增加检测结果合格的可能性。检测过程中的试剂使用量是经过科学计算的，应严格遵守。
